В этом примере показано, как использовать основные методы манипуляции с последовательностями и вычисляет некоторую полезную статистику последовательности. Это также иллюстрирует, как искать кодирование областей (таких как белки) и преследовать последующий анализ их.
В этом примере вы исследуете последовательность ДНК человеческих митохондрий. Митохондрии являются структурами, названными органоидами, которые найдены в цитоплазме ячейки в сотнях к тысячам для каждой ячейки. Митохондрии обычно являются крупнейшим центром выработки энергии у эукариотов, они помогают ухудшить жиры и сахар.
Последовательность согласия человеческого генома митохондрий имеет инвентарный номер NC_012920. Вы можете getgenbank функция, чтобы получить последнюю аннотируемую последовательность от GenBank® в рабочую область MATLAB®.
mitochondria_gbk = getgenbank('NC_012920');
Для вашего удобства ранее загруженная последовательность включена в MAT-файл. Обратите внимание на то, что данные в общедоступных репозиториях часто курируются и обновляются; поэтому результаты этого примера могут немного отличаться, когда вы используете актуальные наборы данных.
load mitochondria
Скопируйте только последовательность ДНК в новую переменную mitochondria. Можно получить доступ к частям последовательности ДНК при помощи регулярных команд индексации MATLAB.
mitochondria = mitochondria_gbk.Sequence; mitochondria_length = length(mitochondria) first_300_bases = seqdisp(mitochondria(1:300))
mitochondria_length =
16569
first_300_bases =
5×70 char array
' 1 GATCACAGGT CTATCACCCT ATTAACCACT CACGGGAGCT CTCCATGCAT TTGGTATTTT'
' 61 CGTCTGGGGG GTATGCACGC GATAGCATTG CGAGACGCTG GAGCCGGAGC ACCCTATGTC'
'121 GCAGTATCTG TCTTTGATTC CTGCCTCATC CTATTATTTA TCGCACCTAC GTTCAATATT'
'181 ACAGGCGAAC ATACTTACTA AAGTGTGTTA ATTAATTAAT GCTTGTAGGA CATAATAATA'
'241 ACAATTGAAT GTCTGCACAG CCACTTTCCA CACAGACATC ATAACAAAAA ATTTCCACCA'
Можно посмотреть на состав нуклеотидов с ntdensity функция.
figure ntdensity(mitochondria)
Это показывает, что геном митохондрий является богатыми A-T. Содержимое GC иногда используется, чтобы классифицировать организмы на таксономию, оно может варьироваться между различными разновидностями от ~30% до ~70%. Измерение содержимого GC также полезно для идентификации генов и для оценки температуры отжига последовательности ДНК.
Теперь вы будете использовать некоторые функции статистики последовательности в Bioinformatics Toolbox™, чтобы посмотреть на различные свойства человеческого митохондриального генома. Можно считать количество основ целой последовательности с помощью basecount функция.
bases = basecount(mitochondria)
bases =
struct with fields:
A: 5124
C: 5181
G: 2169
T: 4094
Они находятся на 5 '-3' скрутки. Можно посмотреть на противоположный дополнительный случай с помощью seqrcomplement функция.
compBases = basecount(seqrcomplement(mitochondria))
compBases =
struct with fields:
A: 4094
C: 2169
G: 5181
T: 5124
Как ожидалось основа рассчитывает на противоположную дополнительную скрутку, дополнительны к количествам на 5 '-3' скрутки.
Можно использовать опцию графика для basecount отобразить круговую диаграмму распределения основ.
figure basecount(mitochondria,'chart','pie'); title('Distribution of Nucleotide Bases for Human Mitochondrial Genome');
Теперь посмотрите на димеры в последовательности и отобразите информацию в столбчатой диаграмме с помощью dimercount.
figure dimers = dimercount(mitochondria,'chart','bar') title('Mitochondrial Genome Dimer Histogram');
dimers =
struct with fields:
AA: 1604
AC: 1495
AG: 795
AT: 1230
CA: 1534
CC: 1771
CG: 435
CT: 1440
GA: 613
GC: 711
GG: 425
GT: 419
TA: 1373
TC: 1204
TG: 513
TT: 1004
В последовательности нуклеотида очевидная вещь искать состоит в том, если существуют какие-либо открытые рамки считывания. ORF является любой последовательностью ДНК или RNA, который может быть потенциально переведен в белок. Функциональный seqshoworfs может использоваться, чтобы визуализировать ORFs в последовательности.
Примечание: В руководстве по HTML только первую страницу выхода показывают, однако при выполнении примера, вы сможете смотреть полный митохондриальный геном с помощью полосы прокрутки на фигуре.
seqshoworfs(mitochondria);
Если вы выдерживаете сравнение этот выход к генам, показанным на странице NCBI, кажется, существует немного меньше ORFs, и следовательно меньше генов, чем ожидалось.
Позвоночные митохондрии не используют Стандартный генетический код, таким образом, некоторые кодоны имеют различное значение в митохондриальных геномах. Для получения дополнительной информации об использовании различных генетических кодов в MATLAB смотрите справку для функционального geneticcode. GeneticCode опция к seqshoworfs функция позволяет вам смотреть на ORFs снова, но на этот раз с позвоночным митохондриальным генетическим кодом.
В человеческой митохондриальной последовательности ДНК некоторые гены также начаты альтернативными кодонами запуска [1]. Используйте AlternativeStartCodons опция к seqshoworfs функционируйте, чтобы искать также эти ORFs.
Заметьте, что существует теперь два намного больших ORFs на третьей рамке считывания: Один запуск в положении 4470 и другой запуск в 5 904. Они соответствуют ND2 (подблок дегидрогеназы NADH 2) и COX1 (цитохром c подблок оксидазы I) гены.
orfs = seqshoworfs(mitochondria,'GeneticCode','Vertebrate Mitochondrial',... 'AlternativeStartCodons',true)
orfs =
1×3 struct array with fields:
Start
Stop
Можно также посмотреть на все функции, которые были аннотированы к человеческому митохондриальному геному. Исследуйте полную запись GenBank mitochondria_gbk с featureparse функция. Особенно, можно исследовать аннотируемые последовательности кодирования (CDS) и сравнить их с ORFs, ранее найденным. Используйте Sequence опция к featureparse функционируйте, чтобы извлечь, если это возможно, последовательности ДНК, соответствующие к каждой функции. featureparse функция дополнит части исходной последовательности в надлежащих случаях.
features = featureparse(mitochondria_gbk,'Sequence',true) coding_sequences = features.CDS; coding_sequences_id = sprintf('%s ',coding_sequences.gene)
features =
struct with fields:
source: [1×1 struct]
D_loop: [1×1 struct]
gene: [1×37 struct]
tRNA: [1×22 struct]
rRNA: [1×2 struct]
STS: [1×28 struct]
misc_feature: [1×1 struct]
CDS: [1×13 struct]
coding_sequences_id =
'ND1 ND2 COX1 COX2 ATP8 ATP6 COX3 ND3 ND4L ND4 ND5 ND6 CYTB '
ND2CDS = coding_sequences(2) % ND2 is in the 2nd position COX1CDS = coding_sequences(3) % COX1 is in the 3rd position
ND2CDS =
struct with fields:
Location: '4470..5511'
Indices: [4470 5511]
gene: 'ND2'
gene_synonym: 'MTND2'
note: 'TAA stop codon is completed by the addition of 3' A residues to the mRNA'
codon_start: '1'
transl_except: '(pos:5511,aa:TERM)'
transl_table: '2'
product: 'NADH dehydrogenase subunit 2'
protein_id: 'YP_003024027.1'
db_xref: {'GI:251831108' 'GeneID:4536' 'HGNC:7456' 'MIM:516001'}
translation: 'MNPLAQPVIYSTIFAGTLITALSSHWFFTWVGLEMNMLAFIPVLTKKMNPRSTEAAIKYFLTQATASMILLMAILFNNMLSGQWTMTNTTNQYSSLMIMMAMAMKLGMAPFHFWVPEVTQGTPLTSGLLLLTWQKLAPISIMYQISPSLNVSLLLTLSILSIMAGSWGGLNQTQLRKILAYSSITHMGWMMAVLPYNPNMTILNLTIYIILTTTAFLLLNLNSSTTTLLLSRTWNKLTWLTPLIPSTLLSLGGLPPLTGFLPKWAIIEEFTKNNSLIIPTIMATITLLNLYFYLRLIYSTSITLLPMSNNVKMKWQFEHTKPTPFLPTLIALTTLLLPISPFMLMIL'
Sequence: 'attaatcccctggcccaacccgtcatctactctaccatctttgcaggcacactcatcacagcgctaagctcgcactgattttttacctgagtaggcctagaaataaacatgctagcttttattccagttctaaccaaaaaaataaaccctcgttccacagaagctgccatcaagtatttcctcacgcaagcaaccgcatccataatccttctaatagctatcctcttcaacaatatactctccggacaatgaaccataaccaatactaccaatcaatactcatcattaataatcataatagctatagcaataaaactaggaatagccccctttcacttctgagtcccagaggttacccaaggcacccctctgacatccggcctgcttcttctcacatgacaaaaactagcccccatctcaatcatataccaaatctctccctcactaaacgtaagccttctcctcactctctcaatcttatccatcatagcaggcagttgaggtggattaaaccaaacccagctacgcaaaatcttagcatactcctcaattacccacataggatgaataatagcagttctaccgtacaaccctaacataaccattcttaatttaactatttatattatcctaactactaccgcattcctactactcaacttaaactccagcaccacgaccctactactatctcgcacctgaaacaagctaacatgactaacacccttaattccatccaccctcctctccctaggaggcctgcccccgctaaccggctttttgcccaaatgggccattatcgaagaattcacaaaaaacaatagcctcatcatccccaccatcatagccaccatcaccctccttaacctctacttctacctacgcctaatctactccacctcaatcacactactccccatatctaacaacgtaaaaataaaatgacagtttgaacatacaaaacccaccccattcctccccacactcatcgcccttaccacgctactcctacctatctccccttttatactaataatcttat'
COX1CDS =
struct with fields:
Location: '5904..7445'
Indices: [5904 7445]
gene: 'COX1'
gene_synonym: 'COI; MTCO1'
note: 'cytochrome c oxidase I'
codon_start: '1'
transl_except: []
transl_table: '2'
product: 'cytochrome c oxidase subunit I'
protein_id: 'YP_003024028.1'
db_xref: {'GI:251831109' 'GeneID:4512' 'HGNC:7419' 'MIM:516030'}
translation: 'MFADRWLFSTNHKDIGTLYLLFGAWAGVLGTALSLLIRAELGQPGNLLGNDHIYNVIVTAHAFVMIFFMVMPIMIGGFGNWLVPLMIGAPDMAFPRMNNMSFWLLPPSLLLLLASAMVEAGAGTGWTVYPPLAGNYSHPGASVDLTIFSLHLAGVSSILGAINFITTIINMKPPAMTQYQTPLFVWSVLITAVLLLLSLPVLAAGITMLLTDRNLNTTFFDPAGGGDPILYQHLFWFFGHPEVYILILPGFGMISHIVTYYSGKKEPFGYMGMVWAMMSIGFLGFIVWAHHMFTVGMDVDTRAYFTSATMIIAIPTGVKVFSWLATLHGSNMKWSAAVLWALGFIFLFTVGGLTGIVLANSSLDIVLHDTYYVVAHFHYVLSMGAVFAIMGGFIHWFPLFSGYTLDQTYAKIHFTIMFIGVNLTFFPQHFLGLSGMPRRYSDYPDAYTTWNILSSVGSFISLTAVMLMIFMIWEAFASKRKVLMVEEPSMNLEWLYGCPPPYHTFEEPVYMKS'
Sequence: 'atgttcgccgaccgttgactattctctacaaaccacaaagacattggaacactatacctattattcggcgcatgagctggagtcctaggcacagctctaagcctccttattcgagccgagctgggccagccaggcaaccttctaggtaacgaccacatctacaacgttatcgtcacagcccatgcatttgtaataatcttcttcatagtaatacccatcataatcggaggctttggcaactgactagttcccctaataatcggtgcccccgatatggcgtttccccgcataaacaacataagcttctgactcttacctccctctctcctactcctgctcgcatctgctatagtggaggccggagcaggaacaggttgaacagtctaccctcccttagcagggaactactcccaccctggagcctccgtagacctaaccatcttctccttacacctagcaggtgtctcctctatcttaggggccatcaatttcatcacaacaattatcaatataaaaccccctgccataacccaataccaaacgcccctcttcgtctgatccgtcctaatcacagcagtcctacttctcctatctctcccagtcctagctgctggcatcactatactactaacagaccgcaacctcaacaccaccttcttcgaccccgccggaggaggagaccccattctataccaacacctattctgatttttcggtcaccctgaagtttatattcttatcctaccaggcttcggaataatctcccatattgtaacttactactccggaaaaaaagaaccatttggatacataggtatggtctgagctatgatatcaattggcttcctagggtttatcgtgtgagcacaccatatatttacagtaggaatagacgtagacacacgagcatatttcacctccgctaccataatcatcgctatccccaccggcgtcaaagtatttagctgactcgccacactccacggaagcaatatgaaatgatctgctgcagtgctctgagccctaggattcatctttcttttcaccgtaggtggcctgactggcattgtattagcaaactcatcactagacatcgtactacacgacacgtactacgttgtagcccacttccactatgtcctatcaataggagctgtatttgccatcataggaggcttcattcactgatttcccctattctcaggctacaccctagaccaaacctacgccaaaatccatttcactatcatattcatcggcgtaaatctaactttcttcccacaacactttctcggcctatccggaatgccccgacgttactcggactaccccgatgcatacaccacatgaaacatcctatcatctgtaggctcattcatttctctaacagcagtaatattaataattttcatgatttgagaagccttcgcttcgaagcgaaaagtcctaatagtagaagaaccctccataaacctggagtgactatatggatgccccccaccctaccacacattcgaagaacccgtatacataaaatctaga'
Создайте карту, указывающую на все функции, найденные в этой записи GenBank с помощью featureview функция.
[h,l] = featureview(mitochondria_gbk,{'CDS','tRNA','rRNA','D_loop'},...
[2 1 2 2 2],'Fontsize',9);
legend(h,l,'interpreter','none');
title('Homo sapiens mitochondrion, complete genome')
Можно перевести последовательности ДНК что код для ND2 и белков COX1 при помощи nt2aa функция. Снова GeneticCode опция должна использоваться, чтобы задать позвоночный митохондриальный генетический код.
ND2 = nt2aa(ND2CDS,'GeneticCode','Vertebrate Mitochondrial'); disp(seqdisp(ND2))
1 MNPLAQPVIY STIFAGTLIT ALSSHWFFTW VGLEMNMLAF IPVLTKKMNP RSTEAAIKYF 61 LTQATASMIL LMAILFNNML SGQWTMTNTT NQYSSLMIMM AMAMKLGMAP FHFWVPEVTQ 121 GTPLTSGLLL LTWQKLAPIS IMYQISPSLN VSLLLTLSIL SIMAGSWGGL NQTQLRKILA 181 YSSITHMGWM MAVLPYNPNM TILNLTIYII LTTTAFLLLN LNSSTTTLLL SRTWNKLTWL 241 TPLIPSTLLS LGGLPPLTGF LPKWAIIEEF TKNNSLIIPT IMATITLLNL YFYLRLIYST 301 SITLLPMSNN VKMKWQFEHT KPTPFLPTLI ALTTLLLPIS PFMLMIL
COX1 = nt2aa(COX1CDS,'GeneticCode','Vertebrate Mitochondrial'); disp(seqdisp(COX1))
1 MFADRWLFST NHKDIGTLYL LFGAWAGVLG TALSLLIRAE LGQPGNLLGN DHIYNVIVTA 61 HAFVMIFFMV MPIMIGGFGN WLVPLMIGAP DMAFPRMNNM SFWLLPPSLL LLLASAMVEA 121 GAGTGWTVYP PLAGNYSHPG ASVDLTIFSL HLAGVSSILG AINFITTIIN MKPPAMTQYQ 181 TPLFVWSVLI TAVLLLLSLP VLAAGITMLL TDRNLNTTFF DPAGGGDPIL YQHLFWFFGH 241 PEVYILILPG FGMISHIVTY YSGKKEPFGY MGMVWAMMSI GFLGFIVWAH HMFTVGMDVD 301 TRAYFTSATM IIAIPTGVKV FSWLATLHGS NMKWSAAVLW ALGFIFLFTV GGLTGIVLAN 361 SSLDIVLHDT YYVVAHFHYV LSMGAVFAIM GGFIHWFPLF SGYTLDQTYA KIHFTIMFIG 421 VNLTFFPQHF LGLSGMPRRY SDYPDAYTTW NILSSVGSFI SLTAVMLMIF MIWEAFASKR 481 KVLMVEEPSM NLEWLYGCPP PYHTFEEPVY MKS*
Можно получить более полное изображение содержимого аминокислоты с aacount.
figure subplot(2,1,1) ND2aaCount = aacount(ND2,'chart','bar'); title('Histogram of Amino Acid Count for the ND2 Protein'); subplot(2,1,2) COX1aaCount = aacount(COX1,'chart','bar'); title('Histogram of Amino Acid Count for the COX1 Protein');
Заметьте высокий лейцин, треонин и изолейциновое содержимое и также отсутствие кислоты аспарагиновой кислоты или цистеина.
Можно использовать atomiccomp и molweight функции, чтобы вычислить больше свойств о белке ND2.
ND2AtomicComp = atomiccomp(ND2) ND2MolWeight = molweight(ND2)
ND2AtomicComp =
struct with fields:
C: 1818
H: 2882
N: 420
O: 471
S: 25
ND2MolWeight =
3.8960e+04
Для дальнейшего расследования свойств белка ND2 используйте proteinplot. Это - графический интерфейс пользователя (GUI), который позволяет вам легко создавать графики различных свойств, такие как гидрофобность, последовательности белка. Нажмите на меню "Edit", чтобы создать новые свойства, изменить существующие значения свойств, или, настроить параметры сглаживания. Нажмите на меню "Help" в графический интерфейсе пользователя для получения дополнительной информации о том, как использовать инструмент.
proteinplot(ND2)
Можно также программно создать графики различных свойств последовательности с помощью proteinpropplot.
figure proteinpropplot(ND2,'PropertyTitle','Parallel beta strand')
codoncount функционируйте считает количество случаев каждого кодона в последовательности и отображает отформатированную таблицу результата.
codoncount(ND2CDS)
AAA - 10 AAC - 14 AAG - 2 AAT - 6 ACA - 11 ACC - 24 ACG - 3 ACT - 5 AGA - 0 AGC - 4 AGG - 0 AGT - 1 ATA - 23 ATC - 24 ATG - 1 ATT - 8 CAA - 8 CAC - 3 CAG - 2 CAT - 1 CCA - 4 CCC - 12 CCG - 2 CCT - 5 CGA - 0 CGC - 3 CGG - 0 CGT - 1 CTA - 26 CTC - 18 CTG - 4 CTT - 7 GAA - 5 GAC - 0 GAG - 1 GAT - 0 GCA - 8 GCC - 7 GCG - 1 GCT - 4 GGA - 5 GGC - 7 GGG - 0 GGT - 1 GTA - 3 GTC - 2 GTG - 0 GTT - 3 TAA - 0 TAC - 8 TAG - 0 TAT - 2 TCA - 7 TCC - 11 TCG - 1 TCT - 4 TGA - 10 TGC - 0 TGG - 1 TGT - 0 TTA - 8 TTC - 7 TTG - 1 TTT - 8
Заметьте, что в гене ND2 существует больше CTA, ATC и кодоны ACC, чем другие. Можно проверять, какие аминокислоты эти кодоны переводятся в использование nt2aa и aminolookup функции.
CTA_aa = aminolookup('code',nt2aa('CTA')) ATC_aa = aminolookup('code',nt2aa('ATC')) ACC_aa = aminolookup('code',nt2aa('ACC'))
CTA_aa =
'Leu Leucine
'
ATC_aa =
'Ile Isoleucine
'
ACC_aa =
'Thr Threonine
'
Чтобы вычислить частоту кодона для всех генов, можно конкатенировать их в одну последовательность перед использованием функционального codoncount. Необходимо гарантировать, что кодоны завершены (три нуклеотида каждый), таким образом, система координат чтения последовательности не потеряна при конкатенации.
numCDS = numel(coding_sequences); CDS = cell(numCDS,1); for i = 1:numCDS seq = coding_sequences(i).Sequence; CDS{i} = seq(1:3*floor(length(seq)/3)); end allCDS = [CDS{:}]; codoncount(allCDS)
AAA - 85 AAC - 132 AAG - 10 AAT - 32 ACA - 134 ACC - 155 ACG - 10 ACT - 52 AGA - 1 AGC - 39 AGG - 1 AGT - 14 ATA - 167 ATC - 196 ATG - 40 ATT - 124 CAA - 82 CAC - 79 CAG - 8 CAT - 18 CCA - 52 CCC - 119 CCG - 7 CCT - 41 CGA - 28 CGC - 26 CGG - 2 CGT - 7 CTA - 276 CTC - 167 CTG - 45 CTT - 65 GAA - 64 GAC - 51 GAG - 24 GAT - 15 GCA - 80 GCC - 124 GCG - 8 GCT - 43 GGA - 67 GGC - 87 GGG - 34 GGT - 24 GTA - 70 GTC - 48 GTG - 18 GTT - 31 TAA - 3 TAC - 89 TAG - 2 TAT - 46 TCA - 83 TCC - 99 TCG - 7 TCT - 32 TGA - 93 TGC - 17 TGG - 11 TGT - 5 TTA - 73 TTC - 139 TTG - 18 TTT - 77
Используйте figure опция к codoncount функционируйте, чтобы показать карту тепла с частотой кодона. Используйте geneticcode опция, чтобы наложить сетку на фигуре, которая группирует синонимичные кодоны соответственно с Позвоночным Митохондриальным генетическим кодом. Наблюдайте конкретное смещение Лейцина (кодоны 'CTN').
figure count = codoncount(allCDS,'figure',true,'geneticcode','Vertebrate Mitochondrial'); title('Human Mitochondrial Genome Codon Frequency')
close all
[1] Баррель, B.G., Bankier, A.T. и Drouin, J., "Различный генетический код в человеческих митохондриях", Природа, 282 (5735):189-94, 1979.